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哈美頓解讀色譜柱與柱色譜的區(qū)別

更新時(shí)間:2017-02-14

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簡(jiǎn)單的說(shuō)色譜柱是一種硬件,而柱色譜則是一種技術(shù),柱色譜法,又稱(chēng)層析法,是一種以分配平衡為機(jī)理的分配方法。
柱色譜概念:
柱色譜是在一根玻璃管或金屬管中迸行的色譜技術(shù),將吸附劑填充到管中而使之成為柱狀,這樣的管狀柱稱(chēng)為吸附色譜柱。使用吸附色譜柱分離混合物的方法,稱(chēng)為吸附柱色譜。這種方法可以用來(lái)分離大多數(shù)有機(jī)化合物,尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離。分離容量從幾毫克到百毫克級(jí),所以,適用于分離和精制較大量的樣品。
在吸附柱色譜中,吸附劑是固定相,洗脫劑是流動(dòng)相,相當(dāng)于薄層色譜中的展開(kāi)劑。吸附劑的基本原理與吸附薄層色譜相同,也是基于各組分與吸附劑間存在的吸附強(qiáng)弱差異,通過(guò)使之在柱色譜上反復(fù)進(jìn)行吸附、解吸、再吸附、再解吸的過(guò)程而完成的。所不同的是,在進(jìn)行柱色譜的過(guò)程中,混合樣品一般是加在色譜柱的頂端,流動(dòng)相從色譜柱頂端流經(jīng)色譜柱,并不斷地從柱中流出。由于混合樣中的各組分與吸附劑的吸附作用強(qiáng)弱不同,因此各組分隨流動(dòng)相在柱中的移動(dòng)速度也不同,zui終導(dǎo)致各組分按順序從色譜柱中流出。如果分步接收流出的洗脫液,便可達(dá)到混合物分離的目的。一般與吸附劑作用較弱的成分先流出,與吸附作用較強(qiáng)的成分后流出。
色譜柱概念:
裝填有固定相用以分離混合組分的柱管,多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤(pán)管形、U形管等形狀,色譜柱可分為填充柱和開(kāi)管柱兩大類(lèi),液相色譜通常均采用填充柱,色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。
色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹(shù)脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達(dá)5——16萬(wàn)/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對(duì)于同系物分析,只要500即可;對(duì)于較難分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子,因此一般10——30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達(dá)到*效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。