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離子交換色譜柱基本原理:
離子交換色譜是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法,其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合,這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的,在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時,離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同,其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同,所以被洗脫到溶液中的順序也不同,從而被分離出來。
離子交換色譜柱的再生方法有兩種:
(1)先用25ml蒸餾水通過柱子以除去緩沖鹽類,再用25ml甲醇沖洗,以除去由于分配效應(yīng)而殘存在骨架中的雜質(zhì),再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類,后用緩沖液平衡。
?。?)先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌,然后用水洗滌(不要用堿性溶液,以防硅膠基質(zhì)溶解),后用緩沖液平衡。